Clonagem molecular
A clonagem molecular é um tipo de trabalho em biologia molecular. É usada para montar moléculas de DNA recombinantes, e para direcionar sua replicação dentro dos organismos hospedeiros. O uso da palavra clonagem significa que uma molécula de DNA de uma única célula viva é usada para fazer uma grande população de células contendo moléculas de DNA idênticas. Os métodos de clonagem molecular são centrais para muitas áreas da biologia e medicina modernas.
A clonagem molecular geralmente utiliza seqüências de DNA de dois organismos diferentes: a espécie que é a fonte do DNA a ser clonado, e a espécie que servirá como hospedeiro vivo para multiplicar (replicar) o DNA recombinante.
Em um experimento de clonagem molecular, o DNA a ser clonado é obtido de um organismo de interesse e depois tratado com enzimas no tubo de ensaio para obter fragmentos menores de DNA. Estes fragmentos são então unidos com DNA vetorial para produzir moléculas de DNA recombinantes. O DNA recombinante é então introduzido em um organismo hospedeiro (tipicamente uma cepa de E. coli de laboratório, benigna e fácil de cultivar). Isto produz uma população de organismos nos quais moléculas de DNA recombinante são replicadas junto com o DNA hospedeiro. Como elas contêm fragmentos de DNA estranho, são microorganismos "transgênicos" ou geneticamente modificados (GMO).
Este processo aproveita o fato de que uma única célula bacteriana pode ser induzida a absorver e replicar uma única molécula de DNA recombinante. Esta única célula pode então ser expandida exponencialmente para gerar uma grande quantidade de bactérias, cada uma delas contendo cópias da molécula recombinante original. Assim, tanto a população bacteriana resultante, quanto a molécula de DNA recombinante, são comumente chamadas de "clones". Estritamente falando, DNA recombinante refere-se a moléculas de DNA, enquanto a clonagem molecular se refere aos métodos experimentais usados para montá-las.
História
A idéia de usar a clonagem molecular para produzir DNA recombinante foi inventada por Paul Berg, que ganhou o Prêmio Nobel de Química em 1980, juntamente com Walter Gilbert e Fred Sanger.
Perguntas e Respostas
P: O que é clonagem molecular?
R: A clonagem molecular é um ramo da biologia molecular usado para reunir moléculas de DNA recombinantes e controlar sua replicação no organismo hospedeiro.
P: Como funciona o processo de clonagem molecular?
R: Em uma experiência de clonagem molecular, o DNA a ser clonado é obtido do organismo de interesse e depois processado com enzimas em um tubo de ensaio para obter fragmentos menores de DNA. Esses fragmentos são então combinados com o DNA vetorial para produzir moléculas de DNA recombinantes. O DNA recombinante é então transferido para o organismo hospedeiro (tipicamente uma linhagem de E. coli de fácil crescimento e benigna). Isso resulta numa população de organismos em que as moléculas de DNA recombinantes se replicam com o DNA hospedeiro.
P: O que contêm esses clones?
R: Os clones contêm fragmentos de DNA estranho, o que os torna microorganismos transgênicos ou geneticamente modificados (OGM).
P: Quantas células bacterianas podem ser induzidas a absorver e replicar uma molécula recombinante?
R: Uma célula bacteriana pode ser induzida a tomar e replicar uma molécula recombinante.
P: O que acontece quando esta única célula se repete?
R: Quando essa única célula se reproduz, ela pode produzir um grande número de bactérias, cada uma contendo cópias da molécula recombinante original.
P: Existe diferença entre "recombinante" e "clonagem molecular"?
R: Estritamente falando, "recombinante" refere-se às moléculas de DNA reais, enquanto "clonagem molecular" se refere aos métodos experimentais usados para montá-las.
