A Interestadual 81 é uma interestadual norte-sul no leste dos Estados Unidos. Vai de Dandridge, Tennessee no sul, até Wellesley Island, Nova York no norte; para uma distância total de cerca de 854,89 milhas (1.375,81 km). Segue as Montanhas Apalaches por quase toda sua extensão.

A Interstate 81 começa no Tennessee, na Interstate 40 em Dandridge. A rota segue as Montanhas Apalaches durante grande parte de sua rota através do Tennessee e Virgínia, servindo cidades como Bristol, Tennessee e Bristol, Virginia, Roanoke, Blacksburg, Lexington, Staunton, Harrisonburg, e Winchester. Em Harrisonburg, a I-81 corta através do campus da Universidade James Madison. Segue sua contraparte mais antiga, a U.S. Route 11, por toda sua extensão na Virgínia.

A Interstate 81 entra brevemente no panhandle oriental da Virgínia Ocidental, servindo a cidade de Martinsburg. Atravessa então o estado de Maryland em um de seus pontos mais estreitos, passando pela "Cidade Hub" de Hagerstown, onde atravessa muitas outras rotas.

A Interstate 81 forma um grande corredor norte-sul através do estado da Pensilvânia, servindo os bairros de Chambersburg e Carlisle, onde se encontra com a Turnpike da Pensilvânia. Mas a I-81 não se intercambia diretamente com ela (os motoristas devem usar o US 11 para se conectar). Ao redor da capital estadual de Harrisburg, a rota forma o trecho nordeste do Cinturão da Capital da Pensilvânia. A rota então viaja para o nordeste em direção ao Vale do Wyoming, onde serve as cidades de Wilkes-Barre e Scranton, depois segue para o norte através da região das Endless Mountains em direção à linha do estado. Embora seja assinada como uma rodovia norte-sul, ela é distintamente nordeste-sudeste e ocasionalmente leste-oeste em todo o estado.

A Interstate 81 entra no estado de Nova Iorque, perto de Binghamton. Ela segue a Rota 11 dos EUA na direção norte-sul, através de grande parte do estado. Serve as cidades de Syracuse (onde cruza a New York State Thruway), e Watertown. A rota termina na fronteira canadense na Ponte das Mil Ilhas, onde atravessa o Rio St. Lawrence, continuando como um curto conector, a Highway 137, que serve a Thousand Islands Parkway e a Highway 401.

A Interstate 81 Corridor Coalition, uma coalizão de seis Estados, foi organizada para lidar com questões ao longo da Interstate 81, tais como tráfego de caminhões e poluição do ar. Desde 15 de outubro de 2008, esta comissão já se reuniu duas vezes.