Fase preparatória
A primeira metade da glicólise é a fase preparatória. Ela começa com a adição de um grupo de fosfato à glicose (Glicose 6-fosfato). Em seguida, o Glicose 6-fosfato é convertido em Frutose 6-fosfato. Outro grupo de fosfato é adicionado transformando-o em frutose -1,6- bifosfato. A frutose -1,6-bifosfato é então dividida em duas, uma parte transformando-se em G3P (Glicose 3-fosfato) e o fosfato de dihidroxiacetona. O fosfato de diidroxiacetona é convertido em G3P, deixando-nos com as duas moléculas de açúcar triose G3P utilizadas na fase de Pay-off.
Fase de pagamento
A segunda metade da glicólise é conhecida como a "fase de pagamento", pelo ganho líquido das moléculas ricas em energia ATP e NADH. Como a glicose leva a dois triose (G3P) de açúcar na fase preparatória, cada reação na fase de pay-off ocorre duas vezes por molécula de glicose. Isto produz 2 moléculas de NADH e 4 moléculas de ATP, levando a um ganho líquido de 2 moléculas de NADH e 2 moléculas de ATP da via glicolítica por molécula de glicose.
Resumo: 2ATP → 4ATP + 2(NADH + H+) + 2 pyruvate (produção líquida de 2ATP)
Respiração aeróbica
As células que realizam respiração aeróbica (respiração usando oxigênio) sintetizam muito mais ATP, mas não como parte da glicólise. Estas reações adicionais utilizam o piruvato da glicólise.
A respiração aeróbica Eukaryote produz cerca de 30 moléculas adicionais de ATP para cada molécula de glicose. A glicólise, através da respiração anaeróbica, é a principal fonte de energia em muitas células.